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[其他] Vero细胞冻存问题

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楼主
发表于 5?小时前 | 只看该作者 回帖奖励 |倒序浏览 |阅读模式
目前在养Vero细胞,冻存再复苏后发现细胞悬浮很多,换液之后4天长满。
我的冻存过程是:2~8℃ 放2h,-20℃以下放2h,-70℃以下过夜,之后放于液氮中。冻存液:20%牛血清+5%DMSO
我的复苏过程是:37℃快速融化,没有离心直接加到培养基中培养,隔天换液。
我有以下几个问题想请教养过Vero细胞的前辈:
1、冻存的程序是不是放2~8℃和-20℃过长?我看见好多都只是放半小时。养过Vero细胞的前辈都是放多久?
2、冻存液的配方有无问题?
3、复苏之后不离心是不是也会造成悬浮细胞过多?

谢谢解答
药徒
沙发
发表于 4?小时前 | 只看该作者
1. 程序降温,可以探讨。3. 离心把DMSO弄掉
板凳
发表于 3?小时前 | 只看该作者
占个楼,看看大神怎么说?
药徒
地板
发表于 3?小时前 | 只看该作者
我之前也尝试过梯度冻存,后来觉得麻烦,就直接扔到液氮里面,不过复苏情况也比较良好。
另外DMSO要多离心几次去除。低浓度的DMSO对细胞是有毒性的。
5#
?楼主| 发表于 2?小时前 | 只看该作者
williams1 发表于 2019-10-8 13:59
我之前也尝试过梯度冻存,后来觉得麻烦,就直接扔到液氮里面,不过复苏情况也比较良好。
另外DMSO要多离心 ...

你好,冻存的也是Vero吗?
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